| ชื่อวิทยานิพนธ์ |
การแสดงออกของยีนของ IFN-(+,g)-inducing factor (IL-18), RANTES และMIP-1(+,a) ในผู้ป่วยที่ติดเชื้อเอชไอวีเปรียบเทียบกับคนปกติที่ไม่ติดเชื้อเอชไอวี
GENE EXPRESSION OF IFN-(+,g)-INDUCING FACTOR (IL-18),RANTES AND MIP-1(+,a) IN HIV POSITIVEPATIENTS AS COMPARED TO HIV SERONEGATIVE INDIVIDUALS |
| บทคัดย่อ(ไทย) |
IL-18 เป็น cytokine ที่มีฤทธิ์สูงเมื่อออกฤทธิ์ร่วมกับ IL-12 ในการกระตุ้นการสร้าง IFN-(+,g) และมีรายงานพบว่าในหลอดทดลอง IL-18 มีฤทธิ์กระตุ้นการแบ่งตัวของเชื้อเอชไอวีใน monocytic cell line ได้ อย่างไรก็ตามยังไม่มีการศึกษาบทบาทแท้จริงของ IL-18 ในพยาธิกำเนิดและทางคลินิกในโรคเอดส์ RANTES และMIP-1(+,a) เป็น (+,b)-chemokines ที่มีฤทธิ์ยับยั้งการเข้าสู่เซลล์ของไวรัสเอชไอวีชนิด CCR-5 tropic และพบว่าการกลายพันธุ์ของยีน CCR-5 และระดับของ(+,a)-chemokines มีบทบาทในการชลอการดำเนินโรคของโรคเอดส์ การศึกษาครั้งนี้เพื่อทราบถึงอัตราการแสดงออกของยีน IL-18, RANTES และ MIP-1(...) ในเม็ดเลือดขาว peripheral blood mononuclear cells (PBMCs) ของผู้ติดเชื้อเอชไอวีกับคนปกติที่ไม่ติดเชื้อ ประชากรตัวอย่างประกอบด้วยอาสาสมัครที่เป็นผู้ติดเชื้อเอชไอวี 30 รายที่ยังไม่ได้รับการรักษาด้วยยาต้านไวรัสเอดส์ หรือยากดภูมิคุ้มกันใดๆ มาก่อน และมารับการตรวจรักษาที่โรงพยาบาลจุฬาลงกรณ์ ทั้งนี้โดยมีผู้ติดเชื้อจำนวนเท่าๆ กันที่มี CD4+ T cell count มากกว่าหรือเท่ากับ และน้อยกว่า 200 เซลล์ต่อลบ.มม.ส่วนกลุ่มเปรียบเทียบได้แก่ ผู้บริจาคโลหิตที่ไม่ติดเชื้อเอชไอวีที่ธนาคารเลือดสภากาชาดไทย จำนวน 15 ราย เลือดตัวอย่าง (heparinized whole blood) จากอาสาสมัคร ได้รับการแยกเม็ดเลือดขาวชนิด PBMCs โดยวิธี Ficoll-Hypague gradientและทำการสกัด RNA และนำไปตรวจวิเคราะห์การแสดงออกของยีน IL-18, RANTESและ MIP-1(+,a) รวมทั้ง (+,b)-actin ซึ่งเป็น housekeeping gene โดยวิธีRT-PCR ผลการศึกษาพบว่า สามารถตรวจพบการแสดงออกของยีน RANTES และ MIP-1(+,a)ใน PBMCs ของอาสาสมัครทุกรายทั้งผู้ติดเชื้อเอชไอวี และอาสาสมัครปกติที่ไม่ติดเชื้อและเกือบทุกราย (14 ใน 15 ราย ในอาสาสมัครปกติที่ไม่ติดเชื้อ, 14 ใน 15 รายในผู้ติดเชื้อเอชไอวี ที่มี CD4+ T cell count ต่ำกว่า 200 เซลล์ต่อลบ.มม. และทุกรายในผู้ติดเชื้อเอชไอวีที่มี CD4+ T cell count (+,>) 200 เซลล์ต่อลบ.มม.)ของอาสาสมัครตรวจพบว่ามีการแสดงออกของยีน IL-18 ใน PBMCs โดยสรุปไม่มีความแตกต่างกันในอัตราการแสดงออกของยีน IL-18, RANTES และ MIP-1(+,a) ในPMBCs ในผู้ติดเชื้อเอชไอวีไม่ว่าจะมีค่า CD4+ T cell count มากหรือน้อยกว่า200 เซลล์ต่อลบ.มม. กับคนปกติที่ไม่ติดเชื้อ และการศึกษานี้ถือเป็นรายงานแรกที่พบว่ามีการแสดงออกของยีน IL-18 ใน PBMCs ของคนปกติที่ไม่ติดเชื้อเอชไอวี และของผู้ป่วยเอดส์ในระยะต่างๆ โดยไม่มีความสัมพันธ์กับค่าของ CD4 counts เนื่องจากในการศึกษานี้วิธีตรวจหา mRNA โดย RT-PCR เป็นวิธี qualitative assay ในกรณีที่มีการแสดงออกของยีนเกือบทุกรายเช่นนี้ การศึกษาต่อไปควรใช้วิธี quantitativeRT-PCR อาจทำให้สามารถแยกความแตกต่างของปริมาณของการแสดงออกของยีนเหล่านี้ระหว่างผู้ติดเชื้อและผู้ไม่ติดเชื้อเอชไอวีได้ |
| บทคัดย่อ(English) |
IL-18, a potent co-stimulator of IL-12 in inducing IFN-(+,g) production, hasbeen shown to enhance HIV replication ~iin vitro~i. However, there is no clinical data ofwhether IL-18 is dysregulated in patients infected with HIV-1. The roles of(+,b)-chemokines, RANTES and MIP-1(+,a), in blocking CCR-5 tropic virus and may alsocontribute in delayed disease progression have been recently reported. This study isto investigate the gene expression of IL-18, RANTES and MIP-1(+,a) in PBMCs of HIV-1infected patients as compared to HIV seronegative healthy donors. Heparinized peripheral blood samples were obtained from 30 HIV-1-infectedpatients (1:1 of CD4+ T cell count < and (+,>) 200 cells/mm('3) with no activeopportunistic infection and without previous antiretroviral and immunosuppressivetreatments, and 15 HIV seronegative blood donors at Chulalongkorn hospital and ThaiRed Cross National Blood Bank, respectively. Peripheral blood mononuclear cells(PBMCs) were separated from the blood samples by Ficoll-Hypaque gradient. RNA wereextracted from PBMCs and then subjected for RT-PCR with specific primers of IL-18,RANTES and MIP-1(+,a) (+,b)-actin RT-PCR was included as a housekeeping gene control. It was revealed that RANTES and MIP-1(+,a) mRNA were detected in PBMCs from allof the subjects either HIV-seropositive or seronegative. Almost all, i.e., 14 of 15in group A (HIV seronegative blood donors), all of group B (HIV-infected with CD4+ Tcell count (+,>) 200 cells/mm('3) and 14 of 15 in group C (HIV-infected with CD4+ T cellcount <200 cells/mm('3) showed mRNA expression of IL- 18 in their PBMCs. This is the first report to show that IL-18, as similar to RANTES andMIP-1(...), was constitutively expressed in PBMCs from both of HIV seronegative andseropositive individuals. The proportion of IL-18 mRNA expression was notstatistically different in the advanced as compared to the less advanced HIV-infectedpatients. This finding may indicate the essential roles as well as the redundancy ofthese cytokine and chemokines in the immune system, and therefore were preserved evenin advanced HIV infection. Nevertheless, as the RT-PCR used in this study was aqualitative method, for more precise comparative analysis, quantitative RT-PCR assayshould be used for the further study. The clear-cut roles of IL-18 both inphysiologic state and in HIV infection required further investigation. |
