รายละเอียดวิทยานิพนธ์
ชื่อวิทยานิพนธ์ การใช้ Metallothionein เป็นตัวบ่งชี้ทางชีวภาพการปนเปื้อนของปรอทในหอยแมลงภู่ ~iPerna viridis~i
METALLOTHIONEIN AS BIOMARKER FOR MERCURY CONTAMINATION IN MUSSEL, ~iPerna viridis~i
ชื่อนิสิต จินดา ป่าสนธ์
Chinda Parsont
ชื่ออาจารย์ที่ปรึกษา ผศ.ดร. ศิริชัย ธรรมวานิชดร. ณรงค์ศักดิ์ พ่วงลาภ
Asst.Prof. Sirichai Dharmvanij, Ph.D. Narongsak Puanglarp, Ph.D.
ชื่อสถาบัน จุฬาลงกรณ์มหาวิทยาลัย. บัณฑิตวิทยาลัย
Chulalongkorn University. Bangkok. (Thailand). Graduate School.
ระดับปริญญาและรายละเอียดสาขาวิชา วิทยานิพนธ์มหาบัณฑิต. วิทยาศาสตร์ ( วิทยาศาสตร์สิ่งแวดล้อม)
Master. Science (Environmental Science)
ปีที่จบการศึกษา 2546
บทคัดย่อ(ไทย) ปรอทเป็นโลหะหนักที่มีพิษร้ายแรง เมื่อมีการปนเปื้อนลงสู่สิ่งแวดล้อม แม้ในปริมาณที่ต่ำก็ส่งผลกระทบต่อสิ่งมีชีวิตต่าง ๆ ได้ ดังนั้นจึงจำเป็นต้องมีเครื่องมือที่สามารถวัดปรอทที่ปริมาณต่ำได้ เมทัลโลไธโอนีน เป็นโปรตีนน้ำหนักโมเลกุลต่ำ พบได้ทั่วไปในพวกยูแคริโอต คุณสมบัติของเมทัลโลไธโอนีนนั้นสามารถจับกับโลหะหนักได้หลายชนิด รวมทั้งปรอทด้วย ในการศึกษาครั้งนี้ จะศึกษาผลกระทบของปรอทที่ความเข้มข้นต่าง ๆ ต่อปริมาณ เมทัลโลไธโอนีน ในหอยแมลงภู่ การทดลองออกแบบเพื่อตรวจหาวิธีวัดปริมาณ เมทัลโลไธโอนีน พบว่า วิธีวัดปริมาณ เมทัลโลไธโอนีน โดยเทคนิค เซมิคอนติเตทีพอาร์ทีพีซีอาร์ (Semi-Quantitative RT-PCR) มีความเป็นไปได้มากกว่าเทคนิคเจลอิเลคโตรโฟรีซิส และซิลเวอร์สเตนนิ่ง (Gel electrophoresis and silverstaining) โดยทำการสกัดปริมาณอาร์เอ็นเอรวมจากท่อทางเดินอาหารของหอย ซึ่งเป็นอวัยวะที่มีการสะสมของเมทัลโลไธโอนีน อยู่มาก เพื่อใช้เป็นแม่พิมพ์ในการสังเคราะห์cDNA ด้วย reverse transcription จากนั้นนำไปเป็นแม่พิมพ์ในปฏิกิริยา PCR ด้วยไพรเมอร์ที่ออกแบบจากยีนเมทัลโลไธโอนีน ได้ผลผลิตขนาด 220 คู่เบส และตรวจสอบความเข้มของแถบดีเอ็นเอโดยเปรียบเทียบกับยีนเบต้าแอค ติน ((+,b) -Actin gene) ซึ่งเป็นตัวอ้างอิงผลการทดลองพบว่า ปริมาณ เมทัลโลไธโอนีน ของหอยกลุ่มทดลองแตกต่างจากกลุ่มควบคุมอย่างมีนัยสำคัญทางสถิติ ตั้งแต่สัปดาห์ที่ 2 ถึง 4 (~ip~i<0.05) โดยพบความแตกต่างที่ความเข้มข้นของปรอท 1 ไมโครกรัมต่อลิตร นอกจากนี้ปริมาณเมทัลโลไธโอนีนยังเพิ่มขึ้นตามความเข้มข้นของปรอทอย่างมีนัยสำคัญทางสถิติ (~ip~i<0.05) ส่วนการศึกษาการแปรผันของยีนเมทัลโลไธโอนีน ด้วยเทคนิค Single Stranded Conformation Polymorphismพบว่าสามารถแยกไอโซฟอร์มของเมทัลโลไธโอนีนได้ทั้งหมด 6 ไอโซฟอร์ม ในการศึกษาครั้งนี้ชี้ให้เห็นว่าปริมาณเมทัลโลไธโอนีน จากท่อทางเดินอาหารของหอยแมลงภู่มีการตอบสนองต่อปริมาณของปรอทที่ได้รับ และการตอบสนองนี้สามารถนำไปใช้ตรวจสอบการปนเปื้อนของปรอทในสิ่งแวดล้อมได้
บทคัดย่อ(English) Mercury (Hg) is one of the most toxic heavy metals. Its discharges to the marineenvironment are of great concern. Very low level of Hg still have chronic effect to manyliving organisms and sophisticated equipment are needed for the measurement at such lowconcentration. Metallothioneins (MT) are low molecular weight cytosolic proteins found ineukaryotic species. They are capable of binding a variety of heavy metals, including Hg.The study focused on the effects of the various levels of dissolved mercury to the levelof metallothionein in mussels, ~iPerna viridis~i. The experiment was designed to verify themethods, effectiveness for the quantification of metallothioneins in mussel. The resultsshow that semi-quantitative RT-PCR is more promisingtechnique than gel electrophoresis andsilver staining in measuring of mussel MT mRNA and eventually this technique can beapplied for the assessment of mercury contamination in mussels. The study focused on thedigestive tract of the mussels which has been shown to play an important role in tissuedistribution of MT. Total RNA from the digestive tract of the mussels exposed to variouslevels of mercuric chloride was extracted and converted to cDNA by reverse transcription.Oligonucleotide primers were designed to amplify a 220 by segment of the mussel MT cDNA.The expression of Beta-actin was used as reference. The RT-PCR data showed that there wasa significant different between treatments and control in digestive tract MT mRNA insubjects within 2 to 4 weeks of mercury exposure (~ip~i < 0.05). At concentration of 1 (+,m).g/LHgCl(,2) induced the MT mRNA levels significantly comparing with control. Moreover, thisstudy also investigated the variation of metallothionein forms in mercury-exposed mussels.Six isoforms were identified by single strand conformation polymorphism (SSCP) method.This data suggests that MT mRNA levels of digestive gland from mussel respond to mercuryexposure and the response could serve as a more useful assessment of mercury contaminationin marine environment.
ภาษาที่ใช้เขียนวิทยานิพนธ์
จำนวนหน้าของวิทยานิพนธ์ 141 P.
ISBN 974-17-5022-6
สถานที่จัดเก็บวิทยานิพนธ์
คำสำคัญ METALLOTHIONEIN, SEMI-QUANTITATIVE RT-PCR, MERCURY, MUSSELS, BIOMARKER
วิทยานิพนธ์ที่เกี่ยวข้อง



© 2009 ฝ่ายบริการความรู้ทางวิทยาศาสตร์และเทคโนโลยี, สำนักงานพัฒนาวิทยาศาสตร์และเทคโนโลยีแห่งชาติ All Rights Reserved.