| รายละเอียดวิทยานิพนธ์ | |
| ชื่อวิทยานิพนธ์ | การจัดจำแนกชนิดของเชื้อ ~iMycobacterium~i โดยวิธีเพิ่มจำนวนชุดของส่วน 16S-23S rDNA spacer เปรียบเทียบกับการเพิ่มจำนวนชุดของยีนต่างๆและวิธีปรับปรุงการตรวจสอบชนิดของเชื้อ ~iMycobacterium~i DIFFERENTIATION OF MYCOBACTERIAL SPECIES BY AMPLIFICATION OF 16S-23S rDNA SPACER COMPARISON TO AMPLIFICATION OF OTHER GENES AND IMPROVEMENT OF THE DETECTION METHOD |
| ชื่อนิสิต | วราลี เถาะสุวรรณ Waralee Torsuwan |
| ชื่ออาจารย์ที่ปรึกษา | ประสิทธิ์ ผลิตผลการพิมพ์ M D สมศักดิ์ เหรียญทอง M Sc มงคล คุณากร M D Prasit Palittapongarnpim M D Somsak Rienthong M Sc Mongkol Kunakorn M D |
| ชื่อสถาบัน | มหาวิทยาลัยมหิดล. บัณฑิตวิทยาลัย Mahidol University. Bangkok (Thailand). Graduate School. |
| ระดับปริญญาและรายละเอียดสาขาวิชา | วิทยานิพนธ์มหาบัณฑิต. วิทยาศาสตร์ (จุลชีววิทยา) Master. Science (Microbiology) |
| ปีที่จบการศึกษา | 2542 |
| บทคัดย่อ(ไทย) | วัณโรคเป็นสาเหตุสำคัญของการเสียชีวิตของประชากรทั่วโลกซึ่งเกิดจากเชื้อวัณโรค (~iMycobacterium tuberculosis~i) นับตั้งแต่มีการแพร่ระบาดของโรคเอดส์ทำให้อัตราการติด เชื้อวัณโรคและเชื้อตัวอื่นๆในกลุ่มนี้สูงขึ้น ดังนั้นจึงจำเป็นต้องหาวิธีจำแนกชนิดของ เชื้อกลุ่มนี้ที่ให้ผลรวดเร็วและถูกต้องกว่าวิธีเดิม โดยได้เปรียบเทียบวิธีการจัดจำแนก ชนิดของเชื้อกลุ่มนี้ด้วยวิธี PCR -REA ของ 16S-23S rDNA spacer กับยีน ~ihsp65~i ~idnaJ~i นอกจากนี้ได้ศึกษาวิธีอื่นๆ ที่ง่ายต่อการจำแนกเชื้อกลุ่มนี้ โดยใช้ probe ที่จำเพาะต่อ 16S-23S r DNA spacer จากผลการทดลองพบว่าวิธี PCR-REA ของ 16S-23S rDNA spacer สามารถจำแนกชนิดของเชื้อ กลุ่มนี้ได้ดีเท่าๆกับ PCR-REA ของ ~ihsp65~i แต่วิธี PCR-REA ของ ~ihsp65~i มีความผันแปร ภายในเชื้อชนิดเดียวกันมากกว่า ส่วนวิธี PCR-REA ของ ~idnaJ~i มีความสามารถในการจำแนก ชนิดของเชื้อได้ต่ำ การปรับปรุงวิธีการจำแนกเชื้อให้ง่ายทำโดยวิธี PCR ELISA และ microtiter plate sandwich hybridization โดยวิธีแรกสามารถตรวจสอบดีเอ็นเอของเชื้อความเข้มข้นน้อย ที่สุดที่ 2 pg ในขณะที่วิธีที่สองสามารถตรวจสอบดีเอ็นเอของเชื้อความเข้มข้นน้อยที่สุดที่ 100 fg นอกจากนี้ได้ทดลองใช้วิธี dot blot hybridization ตรวจสอบเชื้อวัณโรคจากต่อมน้ำ เหลืองได้บางตัวอย่างและทดลองใช้วิธี reverse dot blot hybridization สามารถจำแนกเชื้อ กลุ่มนี้จากตัวอย่างเชื้อที่เพาะจากผู้ป่วยได้ ดังนั้นวิธีเหล่านี้น่าจะมีประโยชน์ในการ ประยุกต์ใช้ในการตรวจสอบชนิดของเชื้อจากผู้ป่วยได้รวดเร็วและถูกต้อง |
| บทคัดย่อ(English) | Tuberculosis, which is caused by ~iMycobacterium tuberculosis,~i is a major cause of mortality in humans. Since the spread of human immunodeficiency virus, the rate of infection by ~iM. tuberculosis~i and ~iMycobacterium~i other than tuberculosis (MOTT) has been increasing. Therefore, other methods for mycobacterial species identification that are more rapid and accurate than the conventional biochemical method are required. In this study, the polymerase chain reaction and restriction enzyme analysis (PCR-REA) of 16S-23S rDNA spacer was compared to PCR-REA of ~ihsp65~i and ~idnaJ~i gene. Moreover, simple methods for identifying mycobacterial species using probe specific to 16S-23S rDNA spacer were studied. It was found that PCR-REA of 16S-23S rDNA spacer could discriminate mycobacterial species as well as PCR-REA of ~ihsp65,~i though PCR-REA of ~ihsp65~i had more intraspecies variation. PCR-REA of ~idnaJ~i had lower discriminating capacity. In the development of simple methods, PCR-ELISA and microtiter plate sandwich hybridization was tested. The first method had a sensitivity such that it could detect DNA concentration as low as 2 pg, while the second method was more sensitive with the lowest detected DNA concentration of 100 fg. Moreover, dot blot hybridization could identify some ~iM. tuberculosis~i from lymph node samples and reverse dot blot hybridization could also identify mycobacterial species from clinical culture. Therefore, these methods will be useful for rapid and accurate method of mycobacterial species identification. |
| ภาษาที่ใช้เขียนวิทยานิพนธ์ | 974-663-077-6 |
| จำนวนหน้าของวิทยานิพนธ์ | |
| ISBN | 132 P. |
| สถานที่จัดเก็บวิทยานิพนธ์ | |
| คำสำคัญ | PCR-REA, 16S-23 S rDNA SPACER, hsp65, clnaJ |
| วิทยานิพนธ์ที่เกี่ยวข้อง | |
