รายละเอียดวิทยานิพนธ์
ชื่อวิทยานิพนธ์ การโคลนและการหาลำดับนิวคลีโอไทด์ของชิ้น cDNA ของเซลล์เม็ดเลือดกุ้งกุลาดำ
MOLECULAR CLONING AND SEQUENCING OF cDNAs OF BLACK TIGER SHRIMP HAEMOCYTES
ชื่อนิสิต ชุติมา เทพฤทธิ์
Chutima Thepparit
ชื่ออาจารย์ที่ปรึกษา อ บุรชัย สนธยานนท์ Ph D อ สกล พันธุ์ยิ้ม Ph D อ อภินันท์ อุดมกิจ Ph D
Burachai Sonthayanon Ph D Sakol Panyim Ph D Apinunt Udomkit Ph D
ชื่อสถาบัน มหาวิทยาลัยมหิดล. บัณฑิตวิทยาลัย
Mahidol University. Bangkok (Thailand). Graduate School.
ระดับปริญญาและรายละเอียดสาขาวิชา วิทยานิพนธ์มหาบัณฑิต. วิทยาศาสตร์ (อณูพันธุศาสตร์และพันธุวิศวกรรมศาสตร์)
Master. Science (Molecular Genetics and Genetic Engineering)
ปีที่จบการศึกษา 2544
บทคัดย่อ(ไทย) กุ้งกุลาดำ ~iPenaeus monodon~i เป็นสัตว์เศรษฐกิจที่สำคัญสำหรับหลายประเทศ ทั้งในแถบเอเชียและแปซิฟิครวมทั้งประเทศไทยซึ่งเป็นผู้ส่งออกกุ้งอันดับหนึ่งของโลก การ ส่งออกผลิตภัณฑ์กุ้งแช่แข็งนำรายได้เข้าสู่ประเทศไทยในแต่ละปีเป็นจำนวนกว่าสองพันล้าน เหรียญสหรัฐ ปัญหาการแพร่ระบาดของโรคติดต่อในกุ้งเป็นสาเหตุสำคัญที่ทำให้เกิดการตาย และการลดจำนวนลงอย่างรวดเร็วและนำมาซึ่งความสูญเสียทางเศรษฐกิจอย่างมหาศาล เพื่อ ศึกษาระบบภูมิคุ้มกันของกุ้งในระดับโมเลกุล การวิจัยครั้งนี้จึงสนใจที่จะศึกษา cDNA ที่มี หน้าที่เกี่ยวข้องกับระบบภูมิคุ้มกัน โดยทำการทดลองโคลน DNA fragment โดยวิธี RT-PCR และ touch-down PCR จาก RNA ที่สกัดจากเซลล์เม็ดเลือดกุ้งซึ่งเป็นเซลล์ที่มีหน้าที่สำคัญ ในระบบภูมิคุ้มกัน ในการวิจัยได้ออกแบบ degenerate primers หนึ่งคู่จากบริเวณที่มีการ อนุรักษ์รหัสที่เรียกว่า Rel homology domain (RHD) ของรหัสยีนกลุ่ม NF-(+,k)B จากคน (~iHomo sapiens~i) หนู (~iMus musculus~i) และแมลงหวี่ (~iD. melanogaster~i) พบว่าการใช้ degenerate primer ดังกล่าวยังไม่สามารถ amplify Relcoding domain sequence จากกุ้งกุลาดำได้ อย่างไรก็ตามจากการศึกษาครั้งนี้ได้พบโคลนอื่นๆ ซึ่งมีความ เหมือนของลำดับกรดอะมิโนกับโปรตีนบางชนิดใน eukaryotes ชนิดอื่นๆ ได้แก่ 14-3-3-like protein, Innexin, (+,a)-tubulin 14-3-3-like protein เป็นโปรตีนที่ทำหน้าที่ หลากหลาย โดยเฉพาะอย่างยิ่งในกระบวนการ signal transduction นอกจากนี้ยังพบ cDNA โคลนอีก 2 ชนิด ซึ่งอาจมีหน้าที่เกี่ยวข้องกับระบบภูมิคุ้มกัน ได้แก่ hemolectin และ thiolester-motif containing protein (complement-like protein) และโคลนอื่นๆ ที่ยังไม่ทราบเอกลักษณ์แน่ชัด ผลการทดลองนี้ชี้แนะว่าโคลนของ hemolectin และ thiolester- motif containing protein น่าจะมีการวิจัยต่อไป เพื่อศึกษาถึงบทบาทที่แน่ชัดต่อความ ต้านทานของเชื้อโรคในกุ้ง
บทคัดย่อ(English) The black tiger shrimp (~iPenaeus monodon~i) is an economically important organism for several countries in Asia and the Pacific, including Thailand, which is the worlds number one shrimp exporter. Exportation of frozen shrimp brings an annual income of two billion US dollars to Thailand. Outbreak of diseases is a major cause of shrimp mortality and economic losses. In order to gain a better understanding of the molecular basis of shrimp defense mechanisms, this study aims to obtain cDNA clones relevant to this function. In this study, we used RT-PCR and touch-down PCR to clone partial cDNA fragments from shrimp haemocytes, the major cell type involved in eliminating invading pathogens. In addition, degenerate primers were designed from a conserved Rel-coding domain of NF-(+,K)B sequences of humans, mice, and ~iD. melanogaster~i. This pair of primers was unsuccessful in amplifying a Relcoding domain sequence from shrimp. However, during cloning attempts, we found other shrimp cDNA sequences that showed highly conserved sequences related to known proteins of other eukaryotes including 14-3-3-like protein, Innexin, and (+,a)-tubulin. More than one type of each sequence was found. 14-3-3 protein is a known multifunctional protein with a marked role in signal transduction. Additionally, we found two clones that might be related to the immune response, namely clones for hemolectin and a thiolester-motif containing protein (complement-like protein) as well as other clones of uncertain identities. The results of this research suggest that the clones for hemolectin and the thiolester-motif containing protein be investigated further for their roles in the shrimp immunity.
ภาษาที่ใช้เขียนวิทยานิพนธ์ 974-664-276-6
จำนวนหน้าของวิทยานิพนธ์
ISBN 95 P.
สถานที่จัดเก็บวิทยานิพนธ์
คำสำคัญ ~iPenaeus monodon~i, RT-PCR, CLONING
วิทยานิพนธ์ที่เกี่ยวข้อง



© 2009 ฝ่ายบริการความรู้ทางวิทยาศาสตร์และเทคโนโลยี, สำนักงานพัฒนาวิทยาศาสตร์และเทคโนโลยีแห่งชาติ All Rights Reserved.